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QIAGEN 12462 DNA質粒純化試劑盒Large-Construct Kit

純化至多50 μg BAC、PAC和P1 DNA或至多200 μg的柯斯質粒DNA和非基因組DNA

• 高效去除基因組DNA污染
• 轉染級別純度的高分子量DNA
• 快速簡單的操作

QIAGEN 12462 DNA質粒純化試劑盒Large-Construct Kit

Performance

使用QIAGEN Large-Construct Kit純化DNA，無基因組DNA的污染（參見"Efficient removal of genomic DNA"）?；蚪MDNA的去除確保準確可靠的進行DNA定量，使一些敏感實驗可在明確的和可重復的條件下進行。

Principle

QIAGEN Large-Construct Kit使用經優化的重力流操作，獲得的DNA的純度顯著高于其他常規方法獲得的DNA的純度。*的ATP-dependent外切酶消化步驟，確保特異性去除基因組DNA。

QIAGEN Large-Construct Kit含有的QIAGEN-tips中*的陰離子交換樹脂專為核酸純化設計。其出色的核酸分離特性可純化得到高純度DNA，相當于經過兩次lvfang銫梯度離心得到的純度。預裝的QIAGEN-tips（參見"Anion-exchange tips"）運用重力沉降原理，減少了質粒制備過程所需的手工操作時間。整個QIAGEN質粒純化系統不使用苯酚、lvfang、溴乙錠和氯化銫等有毒物質，zui大程度減小了對使用者及環境的危害。

Procedure

使用堿裂解法裂解多達500 ml的培養液后（參見"QIAGEN Plasmid Kit procedures"），使用試劑盒中的ATP-dependent外切酶進行消化，確保特異性去除基因組DNA及缺損的高分子量DNA。之后將樣本上樣至陰離子交換柱，在適當的低鹽濃度和pH值條件下，質粒DNA與樹脂特異性結合。用中等鹽濃度的緩沖液洗滌，去除RNA、蛋白質、代謝物和其他小分子的雜質。用高鹽緩沖液洗脫已去除基因組DNA的純化質粒DNA。加入異丙醇使DNA濃縮和脫鹽，之后離心收集。

Applications

QIAGEN Large-Construct Kit純化獲得的DNA適用于各種下游應用，包括：

亞克隆制備DNA文庫

對高分子量DNA直接進行測序

轉染