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Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5) 分子生物試劑

  • 更新時間:  2023-07-27
  • 產品型號:  12391
  • 簡單描述
  • Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)
    貨  號:12391

    產品規格:5

    原 產 地:德國

    產品詳細信息
    EndoFree Plasmid Giga Kit (5)
詳細介紹

Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)


純化得到至多10 mg的無內毒素高轉染級純質粒或柯斯質粒DNA

  • 純化得到的DNA內毒素水平低于0.1 EU/µg

  • 純化流程快,同時去除內毒素

  • 獲得高產量、高拷貝質粒DNA

  • 使用LyseBlue,獲得的裂解和高產量的DNA

EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術,可快速制備不含內毒素的質粒DNA。QIAfilter Cartridges過濾快速澄清裂解液,DNA的產量500 μg(Maxi)、2.5 mg(Mega)和10 mg(Giga)。制備的DNA 純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度,適合超轉染級純的應用。



原理

純化的質粒DNA內毒素污染水平取決于所用的純化方法(參見"Endotoxin levels in plasmid preparations")。硅膠技術純化的DNA具有非常高的內毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內毒素去除步驟,獲得<0.1 EU/µg的質粒DNA。

QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊設計的過濾裝置,用于代替細菌細胞堿裂解后的離心步驟。QIAfilter Cartridges可wanquan去除SDS沉淀,清除細菌裂解液,相比離心可大量節約時間,減少1小時的質粒純化時間。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用內部真空方式輕松高效的清除大量細菌裂解液(注意:該試劑盒不包含瓶子)。

QIAGEN-tips中dute的陰離子交換樹脂(不提供EndoFree Plasmid Buffer Set)專為核酸純化而開發。它的分離性能使得DNA純度與連續兩次CsCl梯度離心獲得的DNA純度相當。由重力流驅動并持續運轉的預裝 QIAGEN-tips,限度減少手動制備質粒所需的時間。整個QIAGEN質粒純化系統不使用有毒物質,如benfen,氯仿,溴化乙錠和CsCl,限 度地減少對用戶和環境的危害。

內毒素,又稱脂多糖或LPS,是大腸桿菌等革蘭氏陰性菌細胞膜的組成部分,如大腸桿菌(參見Bacterial cell wall)。 內毒素在質粒裂解純化過程中釋放出來,并顯著降低內毒素敏感細胞株的轉染效率。此外,內毒素與DNA競爭“自由"轉染試劑,影響轉染實驗中質粒DNA的攝 取。內毒素也誘導巨噬細胞和B細胞等免疫細胞發生非特異性免疫反應,從而導致轉染結果的誤讀。這些反應包括誘導的蛋白質和脂類,如IL-1和前列腺素等的 合成??傮w而言,內毒素在轉染實驗中是不可控變量,影響結果的可重復性,使它們難以對比、解讀。在基因治療研究中,內毒素可造成內毒素休克綜合癥和激活補 體級聯,干擾研究。

Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)

操作流程

在堿性條件下,細菌細胞裂解,使用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。將Endotoxin Removal Buffer加入到過濾后的裂解液中。冰浴后,將純凈的裂解物上樣到陰離子交換柱上,在適當的低鹽和pH條件下,質粒DNA選擇性結合。用中鹽緩沖液清除 RNA、蛋白質、代謝產物和其他低分子量雜質,超純質粒DNA被高鹽緩沖液洗脫(參見QIAGEN Plasmid Kit procedures)。最后DNA由異丙醇脫鹽、沉淀并且離心回收。



應用

使用EndoFree Plasmid Kits純化的DNA適合多種敏感應用,包括:

  • 轉染,包括原代、敏感以及懸浮細胞

  • 基因治療研究

  • 基因沉默

  • 顯微注射




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